Afp system Альфа-фетопротеин


Данный метод может применяться без разбавления образцов, содержащих от 0,2 до 500 МЕ/мл (0,24 – 605 нг/мл) АФП. Первичная калибровка по Первому международному эталону ВОЗ (72/225) для АФП (1)



Скачать 453,21 Kb.
страница2/4
Дата04.08.2018
Размер453,21 Kb.
1   2   3   4

Данный метод может применяться без разбавления образцов, содержащих от 0,2 до 500 МЕ/мл (0,24 – 605 нг/мл) АФП. Первичная калибровка по Первому международному эталону ВОЗ (72/225) для АФП (1).

Не использовать для риска трисомии 21.

2. Справка


Альфафетопротеин (АФП) является эмбриональным сывороточным белком, который циркулирует в следовых количествах в крови здоровых людей (2). АФП продуцируется в основном в эмбриональном желточном мешке и печени плода, и в меньшей степени в желудочно-кишечном тракте плода и почках эмбриона (3). АФП представляет собой одноцепочечный гликопротеин с молекулярным весом около 65-70 кДа. Физико-химические свойства и аминокислотный состав АФП аналогичны свойствам сывороточного альбумина (4), от которого он отличается антигенными характеристиками (5). АФП представляет клинический интерес для онкологии, где сывороточный АФП используется для диагноза и мониторинга опухолей (6, 7, 8), а также в пренатальном скрининге, где АФП амниотической жидкости используют для определения отклонений эмбрионального развития, таких как расщепление позвоночных дуг и синдром Дауна (9). АФП из плазмы плода попадает в его мочу и выделяется в амниотическую жидкость, откуда АФП попадает в кровь матери. Концентрация АФП в плазме плода достигает наибольшей величины (2-3 мг/мл) на 12-14 неделе развития и затем быстро падает (9). Уровни АФП в амниотической жидкости параллельны уровням в плазме плода, но их величина на два порядка ниже (мкг диапазон), чем концентрация АФП в плазме плода. По сравнению с этим, концентрации сывороточного АФП матери возрастают геометрически до 30 недель беременности, а затем падают (10). После рождения ребенка, уровни АФП как у матери, так и у новорожденного, быстро возвращаются к основному физиологическому уровню (< 10 нг/мл).

Почти 70% больных с первичной злокачественной гепатомой показывают повышенные уровни АФП (7). Зарегистрированы уровни от 1000 до 10000 нг/мл (11).

В случае тестикулярной тератомы наблюдается прямое соотношение между степенью повышения уровней АФП и стадией болезни (12). Не найдены повышенные уровни АФП в тестикулярных семиномах (13). Широко описано применение измерений АФП к лечению больных с карциномой (14). Неспособность уровней АФП вернуться к нормальному значению в послеоперационный период предполагает наличие остаточной опухоли.

Повышенные уровни сывороточного АФП наблюдали также в доброкачественных условиях, например, при острых вирусных инфекциях, хроническом активном гепатите и циррозе печени. Повышенный уровень АФП в амниотической жидкости найден был также в других тяжелых состояниях, например, в случае смерти плода, эмбриональной грыжи, и синдрома Тюрнера. Измерение АФП не рекомендуется использовать в качестве скринингового теста для бессимптомных пациентов.


3. Принцип метода


Для тестирования АФП на анализаторе Eclectica необходимы:

  1. Тест-система для определения АФП: специфические реагенты тест-системы Eclectica AFP Reagent Kit для выполнения тестирования и проверки калибровки.

  2. Тест-система для калибровки АФП: для стандартизации.

  3. Тест-система Разбавитель проб 1 Eclectica: для разбавления образцов с высокой концентрацией.

  4. Тест-система общих реагентов для иммунохимии Eclectica: для реакции общей химии.

  5. Промывающий раствор для иммунохимии Eclectica: специфический промывающий раствор для иммунохимии.

  6. Системный промывающий раствор Eclectica для анализатора Eclectica.

В методике анализа Eclectica АФП используются два типа высокоспецифичных моноклональных антител в системе иммуноферментного анализа, который включает стадию магнитного твердофазного разделения. Все времена инкубации и объёмы реагентов определяются специфическим протоколом программного обеспечения.

Определенные количества флуоресцеин-конъюгированных моноклональных антител к АФП и моноклональных антител к АФП, конъюгированных со щелочной фосфатазой, добавляются к образцу, калибратору, уонтролю. Реакционная смесь инкубируется при 37ºС. В процессе инкубации флуоресцеин-конъюгированные моноклональные антитела к АФП связываются с определенным сайтом молекулы АФП. Моноклональные антител к АФП, конъюгированные со щелочной фосфатазой, связываются со вторым сайтом молекулы АФП, формируя сэндвич.

В конце инкубационного периода анти-флуоресцеин, связанный с магнитными частицами, добавляется в избытке. Он быстро и специфично связывается с комплексом моноклональных антител с АФП и осаждается в магнитном поле.

После удаления жидкой фазы и промывки твердой фазы в инкубационную ячейку добавляется раствор ферментного субстрата, фенолфталеин-монофосфат, и каждая ячейка инкубируется при 37ºС. После инкубации, ферментативная реакция останавливается добавлением стоп-раствора, а интенсивность окраски измеряется фотометрически. Интенсивность окраски прямо пропорциональна, в рамках рабочего диапазона теста, концентрации АФП в образце. Концентрация АФП в образце пациента или контроле затем определяется методом интерполяции по сохраненной стандартной кривой.


4. Реагенты – подготовка и хранение


4.1 Тест-система Eclectica AFP Reagent Kit Код 1707600

Не использовать компоненты тест-системы после окончания срока годности.

Тест-система Eclectica AFP Reagent Kit содержит специфические реагенты для выполнения 100 тестов и контроли для 5 проверок калибровки из каждого флакона. Реагенты хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке.



Информация о номере лота, сроке годности и количестве тестов содержится на параметрической карте, которая входит в состав набора Eclectica AFP Reagent Kit. Используйте считыватель параметрических карт для загрузки информации, содержащейся на карте в систему. Для получения дополнительной информации смотрите Руководство пользователя для анализатора Eclectica.

  • 2 флакона Eclectica AFP Реагент Код 1707616

2 флакона, содержащие меченые флуоресцеином и бычьей щелочной фосфатазой мышиные моноклональные антитела к АФП в Трис буфере (> 1%) c овечьими, лошадиными, и бычьими белками и азидом натрия (< 0,1% w/w). Реагент готов к применению и один флакон рассчитан на 50 тестов.

Хранить реагент при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Защищать от воздействия прямых солнечных лучей.

Вскрытый реагент стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 2 недель при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7.

Паспорт материала предоставляется по запросу.



  • 2 флакона Eclectica AFP Контроль 1 Код 1707618

2 флакона, содержащие 2 МЕ/мл (2,42 нг/мл) АФП (1st IRP 72/225) в бычьей сыворотке с глицерином и азидом натрия (< 0,1% w/w). Флакон содержит 1 мл готового к применению контроля.

Хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. В конце тестирования убрать флакон и хранить его закрытым при 2-8ºС, если контроль не используется в последующие 24 часа или в тот же день.

Вскрытый контроль стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 1 недели при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.



Смотрите раздел 7. Паспорт безопасности предоставляется по запросу.

  • 2 флакона Eclectica AFP Контроль 2 Код 1707619

2 флакона, содержащие 200 МЕ/мл (242 нг/мл) АФП (1st IRP 72/225) в бычьей сыворотке с глицерином и азидом натрия (< 0,1% w/w). Флакон содержит 1 мл готового к применению контроля. Хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. В конце тестирования убрать флакон и хранить его закрытым при 2-8ºС, если контроль не используется в последующие 24 часа или в тот же день.

Вскрытый контроль стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 1 недели при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7. Паспорт безопасности предоставляется по запросу.



Каталог: files
files -> Детская стоматология
files -> Лекция №1. «Введение. Анатомо-физиологические аспекты органов ротовой полости и их особенности у различных видов животных»
files -> Стоматология
files -> Стоматология
files -> Учебный план дополнительной профессиональной программы повышения квалификации «Стоматологическая помощь населению»
files -> Учебно-тематический план дополнительной профессиональной программы повышения квалификации «Стоматологическая помощь населению»
files -> Терапевтическая стоматология


Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4


База данных защищена авторским правом ©stomatologo.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница