Afp system Альфа-фетопротеин


Необходимые материалы и оборудование



Скачать 453,21 Kb.
страница4/4
Дата04.08.2018
Размер453,21 Kb.
1   2   3   4

6. Необходимые материалы и оборудование

6.1 Предоставленные Реагенты для тестирования

Тест-система Eclectica AFP Reagent Kit.

Тест-система для калибровки Eclectica AFP Calibration Kit.

Тест-система Разбавитель проб 1 Eclectica.

Тест-система общих реагентов для иммунохимии Eclectica.

Промывающий раствор для иммунохимии Eclectica.

Системный промывающий раствор Eclectica.

Комплект растворов для промывки анализатора Eclectica (код 1700006 – информацию о составе и применении читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).



6.2 Необходимое Оборудование/ принадлежности, поставляемые отдельно

Анализатор иммунохимический Eclectica.

Одноразовые блоки кювет.

Пробирки кат. № 18056 (дополнительную информацию читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).



7. Меры предосторожности и ограничения

Для in vitro диагностики.

Только квалифицированный лабораторный персонал должен использовать данный тест и проведение процедуры тестирования должно быть в соответствии со стандартом GLP (правила лабораторной практики).

Запрещается смешивать реагенты из разных лотов.

Все реагенты следует использовать на анализаторах, которые находятся в хорошем рабочем состоянии и тщательно очищены с помощью Eclectica комплекта растворов для промывки (код 1700006).

Дополнительную информацию об обслуживании и инструкциях по применению читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica.



7.1 Меры безопасности

1. Не пипетировать реагенты ртом.



2. Не курить, не есть, и не использовать косметику в помещениях, где обрабатываются образцы пациентов или реагенты наборов.

3. Кожу порезов и других повреждений следует тщательно защищать соответствующей водостойкой повязкой.

4. Следует избегать самозаражения, попадания брызг на слизистые оболочки, или образования аэрозолей.

5. Следует надевать лабораторные перчатки при обработке образцов пациентов или удалении твердых или жидких отходов.

7.2 Предупреждение о потенциальной биологической опасности

Некоторые реагенты системы Eclectica содержат материал животного происхождения, даже если указано, что он получен от здоровых животных, рекомендуется обращаться с реагентами, следуя тем же мерам предосторожности, что и в работе с потенциально инфекционными образцами.

Некоторые реагенты, используемые в системе Eclectica, могут быть получены из пула сывороток крови человека. Каждая порция крови, использованная для создания пула сывороток, была проверена утвержденными методами FDA (Управление по контролю качества продуктов питания и лекарственных средств) на отсутствие сифилиса, поверхностного антигена вируса гепатита B (HBsAG), вируса гепатита C (HCV) и антител против ВИЧ (HIV 1 + 2). Поскольку, никакой тест не может давать полной гарантии отсутствия вируса гепатита B, ВИЧ и другие инфекционных агентов, то указанные реагенты следует рассматривать как потенциально опасные и обращаться с ними, следуя тем же мерам предосторожности, что и при работе с образцами сыворотки или плазмы. Некоторые реагенты, такие как калибраторы и контроли, могут содержать материал тканей человеческого происхождения. В настоящее время, отсутствует стандартный тест на наличие ВИЧ в таком материале. Поэтому рекомендуется и такие реагенты рассматривать как потенциально опасные.

С такими материалами следует обращаться в соответствии с правилами лабораторной практики, как описано в документе CDC (Центр по контролю заболеваемости, Атланта, США): Универсальные меры предосторожности для предотвращения передачи вируса иммунодефицита человека, вируса гепатита B и других передающихся через кровь патогенов в учреждениях здравоохранения «MMWR» 37:377-387, 1999.



7.3 Опасные химические вещества - Предупреждение

Некоторые реагенты относятся к опасным химическим веществам, согласно классификатору. Для безопасной работы рекомендуется внимательно прочитать информацию в Паспорте безопасности.



7.4 Ограничения

Не использовать ЭДТА и цитрат натрия в качестве антикоагулянта, поскольку они ингибируют ферментативную реакцию. Помутнение, агрегация и выпадение осадка в любом из Eclectica реагентов указывает на возможное ухудшение их качества. Обратитесь за консультацией к вашему региональному дистрибьютору. Как и во всех анализах, на результаты данного теста могут повлиять факторы, присутствующие в образцах некоторых пациентов.

Как в любом иммуноанализе, на результаты могут повлиять факторы, присутствующие в сыворотке пациента. Хотя информация о реагентах была тщательно изучена для того, чтобы уменьшить влияние гетерофильных антител и неспецифических белковых связываний, возможная недостоверность одного образца не может быть исключена, как для всех «Сэндвич» систем.

Для диагностических целей, результат, полученный при данном тестировании всегда должен использоваться совместно с клинической картиной, анамнезом пациента и другими лабораторными исследованиями. Реагенты различных лотов нельзя смешивать вместе.

Применение реагентов, расходных материалов, и запасных частей, отличающихся от поставляемых уполномоченным дистрибьютором, может привести к неправильным результатам.

Следуйте инструкциям по применению, поскольку любая модификация может повлиять на результат.

Использование реагентов, расходных материалов или запасных частей, поставляемых не официальным дистрибьютором, может привести к получению неправильного результата.

Пациенты, получающие терапию моноклональными антителами (мышиными) для диагностических или терапевтических целей могут иметь антимышиные антитела (НАМА). Присутствие НАМА в образце может дать как ложно положительные (высокие), так и ложно отрицательные (низкие) значения при использовании системы с моноклональными антителами. Образцы, содержащие НАМА, не должны анализироваться на системе Eclectica.



8. Отбор образца и хранение

Следующие рекомендации для обработки и хранения образцов крови выпущены Национальным комитетом по клиническим лабораторным стандартам (NCCLS – Doc. H18-A):

- Забор образцов крови проводить с соблюдением стандартных мер предосторожностей при отборе биологических жидкостей.

- В случае образцов сыворотки, обеспечить полную коагуляцию образцов перед центрифугированием:



Примечание: Центрифугирование образцов сыворотки до окончания коагуляции может привести к появлению фибрина. Чтобы избежать неверных результатов из-за присутствия фибрина, следует убедиться в том, что процесс коагуляции полностью завершен перед центрифугированием образцов. Некоторые образцы, в частности образцы пациентов, получающих терапию антикоагулянтами, могут потребовать более длительного времени для коагуляции.

- Пробирки следует хранить закрытыми в вертикальном положении.

- Не использовать образцы, которые находились при комнатной температуре более 8 часов

- Герметически запечатать и охладить образцы (2-8ºС), если раскапывание не выполнено в течение 8 часов.

- Заморозить образцы при температуре -20ºС или ниже, если тестирование не выполнено в течение 48 часов.

- Замораживать образцы только один раз, после размораживания, их следует тщательно перемешать.

Для осветления липемических образцов рекомендуется применение ультрацентрифуги. Гемолизированные образцы могут указывать на несоответствующую обработку образца перед доставкой его в лабораторию; по этой причине, результаты следует интерпретировать с осторожностью.

Требуемый объём: составляет 0,025 мл образца для каждого определения. Этот объём не включает в себя мертвый объём (неиспользуемый объём в пробирке с образцом) или дополнительный объём, требуемый для повторов или для выполнения других тестов для того же самого образца. Дополнительную информацию по определению минимального требуемого объёма читайте в разделе «Требования к объёму образца» в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica.

Перед помещением образца на борт анализатора следует проверить образцы на отсутствие в них фибрина, частиц, и пузырьков воздуха.



8.1 Сыворотка

Внести 5 мл венозной крови в стеклянную или пластиковую пробирку без добавок. Позволить крови свернуться при комнатной температуре (18-25ºС). Отцентрифугировать, и отделить сывороточную фракцию.



8.2 Плазма

Внести 5 мл венозной крови в стеклянную или пластиковую пробирку, содержащую гепарин в качестве антикоагулянта. Отцентрифугировать, и отделить плазменную фракцию.



Не использовать ЭДТА- или цитратную плазму.

8.3 Амниотическая жидкость

Собрать образцы амниотической жидкости в стерильные пластиковые пробирки без добавок. Если образцы амниотической жидкости загрязнены кровью, то следует ограничить источник гемоглобина. Поскольку в плазме плода циркулируют высокие уровни АФП, то образцы, загрязнённые кровью плода, не следует использовать для анализа. Рекомендуется все образцы амниотической жидкости разбавлять онлайн в соотношении 1:100.



9. Процедура анализа

Руководство пользователя для анализатора Eclectica подробно описывает процедуру подготовки, установки, стандартизации, тестирования и контроля качества. Следует выполнять все стандартные процедуры обслуживания, как описано в Руководстве пользователя для получения оптимальных результатов анализа.



  • Набор реагентов, который включает также контроли 1 и 2, идентифицируется по номеру лота, специфичного для данного реагента.

  • Каждый лот набора реагентов можно загрузить только с помощью соответствующей параметрической карточки, входящей в состав реагентов.

  • Нельзя смешивать реагенты разных лотов.

  • Калибровка метода специфична для конкретного лота реагентов.

  • Для каждого нового лота реагентов определяется основная калибровочная кривая (референсная кривая), которую получают при выполнении серии тестов на различных анализаторах.

  • Данные контролей (в единицах OD и концентрации), рассчитанные по референсной кривой, хранятся на параметрической карточке, поставляемой в упаковке набора реагентов, и эти данные представляют «целевые» значения.

  • Данные закодированного лота загружаются в анализатор Eclectica при считывании информации с параметрической карточки.

  • Данные контролей 1 и 2, в единицах сигнала, полученные экспериментально, сравниваются с соответствующим «ожидаемым сигналом».

  • Достоверность калибровочной таблицы оценивается в отношении группы параметров качества и, в случае, когда результаты принимаются, таблица будет загружена в память, связанную с лотом реагентов.

9.1 Рекомендуемый интервал уточнения кривой: 2 недели

Примечание: Проверка калибровки (посредством Контроля 1 и Контроля 2) необходима по истечении 2 недель, при загрузке нового лота специфических реагентов или тест-системы общего назначения, при замене некоторых компонентов системы, или когда измеренная концентрация контрольной сыворотки не соответствует спецификации.

9.2 Время первого результата: 45 минут

10. Контроль качества

Каждой лаборатории рекомендуется регулярно использовать материалы контроля качества и установить свои собственные контрольные диапазоны.

Необходимо проводить измерение многоуровневых контролей при каждом тестировании АФП. Значения АФП, полученные для контрольных материалов, не должны часто выходить за границы контрольных диапазонов, установленных в каждой лаборатории. Если эти контрольные значения регулярно попадают за границы установленных контрольных диапазонов, то следует проверить правильность работы прибора (смотрите раздел «Устранение неисправностей» в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).

11. Расчеты и результаты

Значения образца рассчитываются программой пользователя Eclectica, используя референсную калибровочную кривую и измерение контролей, во время тестирования. Программа анализатора Eclectica подтверждает, что хранящаяся эталонная кривая соответствует специфическим критериям анализа.

В дополнение к имеющейся действительной референсной кривой, измеряемые контроли должны быть в пределах, установленных программой для результатов образцов, чтобы быть распечатанными анализатором Eclectica.

12. Ожидаемые значения

Заявленные ожидаемые результаты по АФП были ранее определены с использованием SR1 AFP. Результаты были подтверждены применением набора Eclectica AFP при тестировании 55 образцов.



12.1 Отсутствие беременности

Распределение значений Eclectica АФП в крови доноров и пациентов со злокачественными и незлокачественными нарушениями показано в следующей таблице. Распределение значений АФП выражено в %.

В данном исследовании 94% доноров крови имели уровни АФП менее 10 МЕ/мл (12,1 нг/мл)

Рекомендуется каждой лаборатории установить свои собственные местные контрольные диапазоны для обследуемого населения.






Число

0-10

МЕ/мл


10,01-20

МЕ/мл


20,01-100

МЕ/мл


100,01-500

МЕ/мл


>500

МЕ/мл


Доноры крови

200

94

4,5

1,5

0

0

Карцинома*

Печени/ желчного пузыря

10

80

20

0

0

0

Яичника

10

90

10

0

0

0

Желудочно-кишечная

20

90

5

5

0

0

Легочная

10

100

0

0

0

0

Молочной железы

20

95

5

0

0

0

Тестикулярная



















Семинома

42

100

0

0

0

0

Несеминома

49

42,9

14,3

22,4

8,2

12,2

Доброкачественная опухоль

Печени/желчного пузыря

50

90

6

2

2

0

Мочеполового тракта

25

88

12

0

0

0

Желудочно-кишечного тракта

24

100

0

0

0

0

Сердечно-лёгочная

25

92

8

0

0

0

* Включает пациентов, получающих и неполучающих терапию.

12.2 Беременность

Для наблюдения за беременностью, вследствие изменений в результатах различных анализов, значения АФП материнской сыворотки и амниотической жидкости выражаются как среднее значение (медиана) и кратное медианы (МоМ) для каждой недели беременности. Каждая лаборатория должна установить своё собственное значение медианы и пограничное значение, основанное на МоМ. Результаты, показанные в следующей таблице, являются среднестатистическими. Данные результаты получены при анализе образцов от нормальных одноплодных беременностей:

Материнская сыворотка

Неделя беременности



Медиана (МЕ/мл)

2,0 МоМ*

2,5 МоМ*

3,0 МоМ*

15

100

34

68

85

102

16

100

39,3

78,6

98,3

117,9

17

100

44,5

89

111,3

133,5

18

100

52

104

130

156

19

90

62,2

124,4

155,5

186,6

Амниотическая жидкость

Неделя беременности



Медиана (КМЕ/мл)

2,0 МоМ*

2,5 МоМ*

3,0 МоМ*

15

30

15,2

30,4

38

45,6

16

40

12,8

25,6

32

28,4

17

40

10

20

25

30

18

40

9,3

18,6

23

27,9

19

27

6,8

13,6

17

20,4

20

7

5,9

11,8

14,8

17

* МоМ (кратное медианы)

где МоМ =



=

Значения АФП определены на основе полной недели беременности, например, образец, полученный на 17-й неделе 6-й день, записывается как 17-я неделя беременности.



12.3 Факторы, связанные с повышенными значениями

Повышенные уровни АФП часто наблюдаются в сыворотке больных со злокачественной гепатомой и определенными герминогенными опухолями яичек и яичников (6, 7). Повышенные уровни АФП наблюдали также в доброкачественных условиях, таких как вирусный гепатит (18) и цирроз печени (19).

При определенных нарушениях развития плода, особенно дефекты открытой нервной трубки, повышенные уровни АФП наблюдали как в амниотической жидкости (9), так и в материнской сыворотке (20). Высокие концентрации АФП в материнской сыворотке наблюдали также в других условиях эмбриональных осложнений, таких как пупочная грыжа (21) и угрожающий аборт (22), и при многоплодных беременностях (23).

Показано, что эндогенные факторы, например человеческие анти-мышиные антитела, в человеческой сыворотке являются причиной ложно повышенных значений антигена в иммуноанализе (16).



13. Технические характеристики

13.1 Диапазон калибровки

0,2 - 500 МЕ/мл (ВОЗ 1-й IRP 72/225).

Результаты теста Eclectica АФП выражаются в единицах МЕ/мл.

Коэффициент пересчета: МЕ/мл х 1,21 = нг/мл.

Эту альтернативную единицу измерения можно заранее запрограммировать в анализаторе Eclectica. Дополнительную информацию смотрите в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica.

13.2 Эффект прозоны

При концентрациях АФП до 10 000 МЕ/мл (12100 нг/мл) эффект прозоны не наблюдался.

13.3 Разбавление

Пять образцов сыворотки, содержащие концентрации АФП в пределах аналитического диапазона (0,2 - 500 МЕ/мл, 0,24 – 605 нг), были разбавлены онлайн Разбавителем проб 1 Eclectica и протестированы, используя два анализатора и два лота реагентов. Процент измеренных неразбавленных значений рассчитан, и примеры показаны в следующей таблице.



Фактор разбавления

n

% восстановления значения

SD

1:10

5

106,8

NA

1:25

5

103,1

5,18

1:100

5

97,8

6,96

13.4 Воспроизводимость

Воспроизводимость теста АФП была определена повторяющимся анализом образцов в четырех повторах в течение 20 дней, один анализ в день, всего 20 анализов и 80 повторов, используя два анализатора. Полученные результаты показаны в следующей таблице. Значения выражены в МЕ/мл.



Образец

Среднее

SD

CV, %

Внутрисерийная

1

19,14

0,935

4,9

2

100,98

5,34

5,3

3

225,8

14,3

6,3

Межсерийная

1

19,14

1,3

6,8

2

100,98

6,51

6,4

3

225,8

13,6

6,0

Общая

1

19,14

1,6

8,4

2

100,98

8,42

8,3

3

225,8

19,7

8,7

13.5 Чувствительность

Предел чувствительности теста равен 0,2 МЕ/мл (0,24 нг/мл), и определяется как концентрация АФП, эквивалентная средней оптической плотности Калибратора А плюс два стандартных отклонения, основанных на 20 повторах образца с нулевым аналитом.



13.6 Специфичность

Перекрестная реактивность теста АФП была оценена измерением различимого ответа теста на разнообразные химиотерапевтические лекарственные средства, обладающие потенциальной перекрестной реактивностью. Не было обнаружено обнаружимой перекрестной реакции со следующими химиотерапевтическими лекарственными средствами. Полученные результаты показаны в таблице.



Химиотерапевтические лекарства

Перекрестная реакция

циклофосфамид

доксорубицин гидрохлорид

метотрексат

мегестрол ацетат

винбластин

винкристин

блеомицин

цисплатин

актиномицин

фторурацил



до 250 мг/л

до 7 мг/л

до 10 мг/л

до 40 мг/л

до 5 мг/л

до 5 мг/л

до 10 мг/л

до 60 мг/л

до 5 мг/л

до 5 мг/л



13.7 Сравнение метода

Метод Eclectica AFP сравнивали с эталонным методом, используя SR1.

Образцы сывороточного АФП анализировали двумя методами. С помощью анализа линейной регрессии получены следующие результаты:

у = 1,038 х – 3,0

r = 0,953

x = эталонный SR1 AFP метод

у = Eclectica AFP

n = 55


14. Литература

Sizaret, P., Anderson, S.G., The International Reference Preparation for alpha-fetoprotein. J. Biol. Standardization 4:149, 1976.

2. ABELEV, G.I., Production of embryonal serum Alpha-globulin by hepatomas. Review on Experimental and Clinical Data. Cancer Res. 28:1344, 1968.

3. Mackiewicz, A., Breborowicz,.I, The in-vitro production of Alpha-fetoprotein variants by human fetal organs. Oncodev. Biol. Med. 1:251, 1980.

4. Urano, Y., Sakai, M., Watanabe, K., Tamaoki, T., Tandem arrangements of the Albumin and Alpha-fetoprotein genes in the human genome. Gene 22:225, 1984.

5. Ruoslahti, E., Seppala, M., Studies of carcino-fetal proteins. Physical and Chemical properties of human Alpha-fetoprotein. Int. J. Cancer 7:218, 1971.

6. Masopust, T., Kithier, K., Radl, J., Koutecky, J., Kotal, L., Occurrence of fetoprotein in patients with neoplasma and non-neoplastic diseases. Int. J. Cancer 3:364, 1968.

7. Waldmann, T.A., McIntire, K. R., The use of a radioimmuno-assay for Alpha-fetoprotein in the diagnosis of malignancy. Cancer 34:1510, 1974.

8. Abelev, G. I., Alpha-fetoprotein in ontogenesis and its association with malignant tumours. Adv. Cancer Res. 14:295, 1971.

9. Brock, D. J. H., Mechanism by which amniotic fluid Alpha-fetoprotein may be increased in fetal abnormalities. Lancet (ii): 345, 1976.

10. Gitlin, G., Normal biology of Alpha-fetoprotein. Ann. N. Y. Acad. Sci. 259:7, 1975.

11. Ruoslahti, E., Hirar, H., Alpha-fetoprotein: Physiology and Pathology during pregnancy and application to antenatal diagnosis. Scand. J. Immunol. 8:3, 1978.

12. Masseyeff, R. F., Alpha-fetoprotein: Use in screening. In Immunodiagnosis of Cancer. Herberman, R.B., and McIntire, R. K., (Eds) Marcell Dekker Inc. New York pp 117 - 129, 1979.

13. Scardino, R. T., Cox, H. D., Waldmann, T. K., McIntire, K.P., Mittemeyer, B., Javadpour, N., The value of serum tumour markers in the staging and prognosis of germ cell tumours of the testis. J. Urol. 118:994, 1977.

14. Lange, P. H., McIntire, K. R., Waldmann, T. A., Hakala, T.R., Fraley, E.E., Serum Alpha-fetoprotein and human chorionic gonadotrophin in the diagnosis and management of non-seminomatous germ cell testicular cancer. New Engl. J. Med. 295:1237, 1976.

15. Kinders, R.J., Hass, G.M., Interference in immunoassay by human anti-mouse antibodies. Eur. J. Cancer. 26 (5):647, 1990.

16. Boscato, L.M., Stuart, M.C., Incidence and specificity of interference in two-site immunoassays. Clin. Chem. 32 (8): 1491, 1986.

17. Horacek, K.L., Pepperell, R.J., Hay, D.L., Barrie, J.V., Battery, B.W., Detection of feto-maternal hemorrhage by measurement of maternal serum AFP. Lancet (ii): 200, 1976.

18. Kew, M.C., Purves, L.R., Bersohn, I., Serum alpha-fetoprotein levels in acute viral hepatitis. Gut 14:939, 1973.

19. Sakamoto, S., Yachi, A., Anzai, T., Wada, T., Alpha-fetoprotein producing cells in hepatitis and in liver cirrhosis. Ann. N.Y. Acad. Sci. 259:253, 1975.

20. Macri, J.N., Weiss, R.R., Prenatal serum alpha-fetoprotein screening for neural tube defects. Obstet. Gynecol. 59:633, 1982.

21. Palomaki, G.E., Hill, L.E., Knight, G.J., Haddow, J.E., Carpenter, M., Second trimester maternal serum alpha-fetoprotein levels in pregnancies associated with gastroschisis and omphalocele. Obstet. Gynecol. 71:906, 1988.

22. Wald, N., Barker, S., Cuckle, H., Brook, D.J.H., Stirrat, S.M., Maternal serum alpha-fetoprotein and spontaneous abortion. Br. J. Obstet. Gynecol. 84:357, 1977.

23. Redford, D.H., Whitfield, C.R., Maternal serum alpha-fetoprotein in twin pregnancies uncomplicated by neural tube defect. Am. J. Obstet. Gynecol. 152(5):550, 1985.



24. Davenport, D.M., Macri, J.N., The clinical significance of low maternal serum alpha-fetoprotein. Am. J. Obstet. Gynecol. 146:657, 1983.

Каталог: files
files -> Детская стоматология
files -> Лекция №1. «Введение. Анатомо-физиологические аспекты органов ротовой полости и их особенности у различных видов животных»
files -> Стоматология
files -> Стоматология
files -> Учебный план дополнительной профессиональной программы повышения квалификации «Стоматологическая помощь населению»
files -> Учебно-тематический план дополнительной профессиональной программы повышения квалификации «Стоматологическая помощь населению»
files -> Терапевтическая стоматология


Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4


База данных защищена авторским правом ©stomatologo.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница