Цитогенетические и молекулярно-генетические методы в пренатальной диагностике хромосомных заболеваний



Скачать 103,57 Kb.
Дата27.07.2018
Размер103,57 Kb.
Цитогенетические и молекулярно-генетические методы

в пренатальной диагностике хромосомных заболеваний

(Информационно-методическое письмо)


По данным Всемирной организации здравоохранения, примерно 2,5-3% всех новорожденных имеют различные пороки развития, из них около 1% составляют генные болезни, 0,5% хромосомные болезни и около 2% приходится на врожденные пороки развития (ВПР), обусловленные различными факторами.

Для ранней диагностики наследственной и/или врожденной патологии проводится пренатальная диагностика, которая включает комплекс непрямых (обследование беременной женщины) и прямых (непосредственное обследование плода) методов исследования. Прямые методы подразделяются на неинвазивные и инвазивные, связанные с исследованием плодного материала.

В настоящее время проблема цитогенетической диагностики практически на любом сроке беременности решена. Разработаны надежные и эффективные методы хромосомного анализа клеток плода и зародышевых оболочек. В зависимости от срока беременности и задач исследования материалом для хромосомного анализа могут быть клетки амниотичeской жидкости, хориона, плаценты и лимфоцитов пуповинной крови плода, полученные тем или иным инвазивным способом.

В Центре охраны здоровья семьи и репродукции (ЦОЗСиР) АОКБ пренатальная диагностика проводится с 2004 года. Наиболее часто исследуются биоптаты ворсин хориона (9-13 недель) или плаценты (14-15 недель), пуповинная кровь плода (15-22 недели), полученные с помощью трансабдоминальной хорионбиопсии, плацентоцентеза или трансабдоминального забора пуповинной крови. Хромосомные препараты из тканей хориона/плаценты, лимфоцитов крови готовят прямым или непрямым методом. В цитогенетической лаборатории ЦОЗСиР исследуется абортный материал для диагностики хромосомной патологии плода у женщин с замершей беременностью, либо прерванной по медицинским показаниям со стороны плода.

Диагноз хромосомной аномалии ставится по результатам цитогенетического исследования (кариотипирования). Применяется метод кариотипирования с дифференциальной окраской хромосом (GTG-кариотипирование) (рис. 1). Уникальность метода состоит в том, что он позволяет одновременно проводить анализ всего кариотипа и определять не только хромосомную патологию связанную с изменением количества хромосом, но и определить хромосомные перестройки. Однако существуют ограничения данного метода, такие как трудоемкость и длительность (15-30 дней), не позволяющие быстро сделать заключение о наличии хромосомной патологии у плода.

Введение в практику молекулярно-генетических методов позволило дополнить стандартный цитогенетический анализ новыми возможностями. Наибольшее распространение среди них получили методы интерфазной флюоресцентной in situ гибридизации (FISH- метод), количественной флюоресцентной полимеразной цепной реакции (КФ-ПЦР) и в меньшей степени мультиплексной лигазной цепной реакции и метод сравнительной геномной гибридизации. В пренатальной диагностике эти методы применяются в качестве дополнительных при необходимости быстрой диагностики состояния плода с высоким риском хромосомной патологии (в числе случае числовых хромосомных аномалий-анеуплоидий) или невозможности проведения стандартного GTG- кариотипирования.


Рис. 1 GTG-кариотипирование

(нормальный хромосомный набор)

В ЦОЗСиР внедрен метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH- метод) на интерфазных ядрах и ФГА-стимулированных лимфоцитах (рис.2), что позволяет в сжатые сроки определиться с диагнозом, при невозможности выполнения стандартного цитогенетического исследования у беременных с высоким риском рождения ребенка с хромосомной патологией. Достоверность метода составляет 98%. Этот метод используется для диагностики трисомий по хромосомам 13 (синдром Патау), 18 (синдром Эдвардса), 21 (синдром Дауна) и синдромов связанных с нарушением числа половых хромосом (Клайнфельтера и Тернера). По показаниям проводится диагностика микроделяционных синдромов: синдром Вольфа-Хиршхорна, синдром кошачьего крика, синдром Вильямса, синдром GATA 4, синдром Ди-Джорджи II, синдром Ангельмана и Прадера-Вилли, врожденная диафрагмальная грыжа, синдром Миллера Дикера и Смита-Магенса, нейрофиброматоз I типа, синдром Ди-Джорджи I.



Огромное значение FISH-методика имеет в случае обнаружения мозаичного варианта хромосомной патологии для подтверждения диагноза, в особенности при наличии небольшого клона патологических клеток.

Но, несмотря на все преимущества данного метода, «золотым стандартом» диагностики хромосомных аномалий остается метод стандартного цитогенетического исследования. Поэтому, в случае выявления той или иной хромосомной патологии с помощью молекулярно-генетического метода, диагноз может быть поставлен самостоятельно. Если при FISH-исследовании материала, полученного от плода с аномалиями развития и/или высоким риском хромосомной патологией по результатам раннего пренатального скрининга (УЗИ+биохимические маркеры 12-14нед.), не обнаружено хромосомных аббераций, необходимо проведение традиционного кариотипирования.


Рис. 2 FISH-анализ с прицентромерными пробами ДНК (кариотип пациентки 47,ХХ+15)

Положительный результат, то есть наличие анеуплоидии, дает основание для постановки диагноза, но для выявления механизма возникновения хромосомной аномалии и определения риска развития патологии у следующего плода необходимо исследование кариотипов членов семьи.



Стратегия генетических лабораторных исследований должна определяться целями пренатальной диагностики, а тактика последовательного применения того или иного генетического метода – конкретным клиническим случаем.
Подготовили: Малер А.И., Поздеева Т.Ю., Самохвалов В.А., Центр охраны здоровья семьи и репродукции ГАУЗ АО «Амурская областная клиническая больница», г. Благовещенск, 2016 г.
Литература:

  1. Кулешов Н.П., Мутовин Г.Р. Молекулярно-цитогенетические методы в диагностике хромосомных болезней. Медицинский научный и учебно- методический журнал. 2007

  2. Лебедев И.Н. Современные молекулярно- цитогенетические технологии в репродуктивной биологии и медицине. Медицинская генетика. 2007

  3. Золотухина Т.В. Пренатальная цитогенетика: вчера, сегодня, завтра. Медицинская генетика 2007.

Каталог: files -> letters -> 2016
2016 -> Герниопластика без натяжения при паховых и вентральных грыжах
2016 -> Тактика ведения детей с врожденной хирургической патологией.
2016 -> Диагностика и лечение внутричерепной гипертензии
2016 -> Наружные отиты. Алгоритмы диагностики и лечения
2016 -> Диагностический алгоритм и тактика лечения воспалительных заболеваний среднего уха
2016 -> Профилактика урологических осложнений у пациентов с нарушением функции тазовых органов
2016 -> Опущение (пролапс) органов малого таза у женщин.
2016 -> Современное течение, лечение, профилактика
2016 -> Воспалительные заболевания кишечника (язвенный колит и болезнь крона), современные подходы к лечению


Поделитесь с Вашими друзьями:


База данных защищена авторским правом ©stomatologo.ru 2019
обратиться к администрации

    Главная страница