Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных стрептококком группы B



Pdf просмотр
страница3/5
Дата01.08.2018
Размер0,52 Mb.
1   2   3   4   5
6. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ S. AGALACTIAE К
АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ
Исследование чувствительности S. agalactiae к антимикробным препаратам проводится в соответствии с рекомендациями Европейского комитета по определению чувствительности к антимикробным препаратам
(European Committee on Antimicrobial Susceptibility testing – EUCAST, v.5.0)
[114] и Клиническими Рекомендациями по определению чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (версия 2015-02) [115].

31
Применяют метод определения пограничные концентрации (МПК)
(breakpoint) и диско-диффузионный метод (ДДМ).
6.1. Методы определения чувствительности Streptococcus agalactiae к
антимикробным препаратам
Метод пограничных концентраций реализован в коммерческих тест – системах
(панели, карты и т.д.) для определения антибиотикочувствительности на автоматических и полуавтоматических бактериологических анализаторах.
Для ДДМ применяют питательную среду Мюллера-Хинтон с 5% дефибринированной лошадиной кровью и 20 мг/л β-НАД в чашках Петри. Для приготовления инокулята используют метод прямого суспендирования в стерильном изотоническом растворе колоний чистой 18-24-часовой культуры
СГВ, выросшей на плотных питательных средах. Для этого стерильной микробиологической петлей или ватным тампоном необходимо собрать несколько морфологически схожих колоний и суспендировать в стерильном изотоническом растворе. Бактериальную суспензию необходимо довести до плотности 0,5 по стандарту мутности МакФарланда.
Инокулюм наносят стерильным тампоном на поверхность агара
Мюллера-Хинтон с 5% дефибринированной лошадиной кровью и 20 мг/л β-
НАД. Чашки инкубируют в микроаэрофильных условиях в атмосфере с 5%
CO
2
, при температуре 34-36 ºC в течение 16-20 ч.
В соответствии с действующими рекомендациями [114,115], а также учитывая рекомендации по назначению антимикробных препаратов в акушерстве и неонатологии, рекомендуется определять чувствительность S.
agalactiae к бензилпенициллину, эритромицину, клиндамицину и ванкомицину.
Регламентировано обязательное определение индуцибельной резистентности S. agalactiae к клиндамицину [114,115] для выявления антагонизма между клиндамицином и макролидами. Если антагонизм не выявляется, изолят оценивается как чувствительный. При выявлении

32 антагонизма, изолят оценивается как чувствительный, но для пациентов с тяжелой инфекцией монотерапия клиндамицином противопоказана из-за возможности развития полной резистентности в процессе терапии
(CIII)
. Для выявления антагонизма (D-феномена) следует расположить диски с эритромицином и клиндамицином рядом на расстоянии 12-16 мм между краями дисков [115].
Критерии интерпретации результатов определения чувствительности S.
agalactiae к антимикробным препаратам, а также пограничные значения МПК
(мг/л) и пограничные значения для ДДМ (мм) представлены в таблице.
Таблица. Критерии оценки чувствительности S. agalactiae к
антимикробным препаратам.
Антибактериальные препараты
Пограничные значения МПК
(мг/л)
*
Содержание
АБП в диске (мкг)
Пограничные значения ДДМ
(мм)
*
Перекрестная чувствительность
S ≤
R >
S ≥
R <
Бензилпенициллин
0,25 0,25 1ед
18 18 пенициллин, цефалоспорины
Эритромицин
0,25 0,5 15 21 18 азитромицин, кларитромицин, рокситромицин
Клиндамицин
0,5 0,5 2
17 17
Ванкомицин
2 2
5 13 13
* R – устойчивость, S – чувствительность
7. АЛГОРИТМ
ПРИМЕНЕНИЯ
РАЗЛИЧНЫХ
МЕТОДОВ
ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ S. AGALACTIAE
На основании выявления S. agalactiae диагностируют либо наличие СГВ
– инфекции у беременной или новорожденного, либо, в случае обследования беременных без клинических признаков инфекции, определяют риск передачи возбудителя ребенку во время родов или в последующем. Бактериурия считается клиническим фактором риска независимо от титра бактерий и срока гестации.

33
На результативность исследования на СГВ клинического материала влияют многочисленные факторы, в т.ч. правильность взятия, хранения и транспортировки материала в лабораторию, своевременность его исследования, алгоритм и методология микробиологического исследования
(использование сред обогащения (накопления), хромогенных сред, условия культивирования, качество кровяного агара).
Много случаев инфекции остаются недиагностированными вследствие ошибок, допускаемых при идентификации возбудителя, часть штаммов которого проявляют атипичные гемолитические и другие нетипичные свойства. Применение комплекса методов идентификации S. agalactiae позволяет избежать диагностических ошибок. Окончательный диагноз ставят на основании сопоставления результатов лабораторных анализов с данными анамнеза и результатами клинического обследования.
В настоящих Клинических рекомендациях в качестве метода для выявления СГВ - колонизации беременных предлагается взятие вагинально- ректального мазка, с последующим посевом на хромогенные питательные среды для выделения S. agalactiae, с последующим определением чувствительности к антибиотикам пенициллину, клиндамицину и эритромицину (приложение 6). В родах (при любом сроке беременности) при выявлении хотя бы одного из клинических факторов риска СГВ - инфекции
(раздел Клинические формы инфекций, вызванные стрептококком группы В), используют обследование с применением тестов по месту лечения (CII) (Point-
of-care testing) и превентивное назначение антибиотиков до рождения ребёнка
(AIII) (приложение 7). Обследование всех новорожденных групп риска инфекций (мазки из ротоглотки и прямой кишки, меконий, желудочный аспират, кровь и т.д.) на СГВ проводить как молекулярно-генетическим так и культуральным методом (AII) (приложение 8).
8. ХРАНЕНИЕ ШТАММОВ

34
Для сохранения жизнеспособности и стабильности таксономических и других признаков культуры S. agalactiae замораживают двумя способами:
1.
Несколько (3-5) колоний чистой культуры S. agalactiae с помощью микробиологической петли 1 мкл помещают в коммерческую готовую среду в микропробирках, содержащих бусины и специальный криоконсервант.
Флаконы с культурами хранят при температуре -70°С и ниже в низкотемпературном морозильнике. При необходимости исследования свежей культуры стрептококков из флакона извлекают одну из бусин и восстанавливают в триптиказо-соевом бульоне.
2.
Выделенные культуры хранят в 600 мкл триптиказо-соевого бульона, который разливают в микропробирки объемом 2 мл, сверху заливают 200 мкл стерильным вазелиновым маслом или глицерином. Микропробирки с культурами хранят в низкотемпературном морозильнике при температуре -
70°С и ниже. Восстанавливают культуры путем размораживания из микропробирки.
9. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
9.1. Внутрилабораторный контроль качества исследования
Порядок ведения внутреннего контроля качества, периодичность и частота выполняемых процедур устанавливается действующей в лаборатории системой менеджмента качества в соответствии с нормативной документацией [76,77,116-120].
Внутрилабораторный контроль качества включает преаналитический, аналитический и постаналитический этапы ведения лабораторных исследований. Необходимо также проводить периодические, не реже 1 раза в год проверку технической компетентности персонала лаборатории, а для тестов применяемых по месту лечения и нелабораторного персонала.
Документальное оформление результатов проведенных контрольных процедур осуществляется по утвержденным действующей системой менеджмента качества формам. Регистрация проведения контроля должна

35 осуществляться на всех уровнях: преаналитическом, аналитическом и постаналитическом, для каждого этапа должны быть разработаны и документированы правила проведения всех процедур. Регистрация и хранение контрольных результатов могут осуществляться на электронных носителях.
Контроль преаналитического этапа должен быть выполнен при сборе образца, хранении, доставки, ручной обработки и регистрации. Для этого должны быть разработаны стандартные операционные процедуры (СОП) для сотрудников лаборатории и медицинского персонала родовспомогательного медицинского учреждения, с информацией о процедуре взятия биоматериала, условиях и сроках хранения проб и правилах безопасной транспортировки.
Процедура ведения аналитического этапа регламентирует порядок контроля за соблюдением требований к условиям проведения анализа
(лабораторные помещения, воздушная среда, температурные режимы инкубации и хранения, режимы дезинфекции и стерилизации и т.д.), выполнение процедуры ведения контрольных штаммов бактериальных культур, контроль качества питательных сред, контроль качества тест-систем и реагентов, контроль качества дистиллированной воды.
Контроль качества материалов и оборудования включает: соблюдение сроков годности реактивов и наборов реагентов, наличие на рабочем месте
СОП по эксплуатации каждого прибора, наличие журналов регистрации сервисного обслуживания и ремонта оборудования.
Для ведения контроля качества аналитического этапа микробиологической диагностики инфекций беременных и новорожденных, вызванных стрептококком группы B, необходимо наличие в лаборатории коллекции контрольных штаммов типовых культур Staphylococcus aureus
(ATCC 25923), Enterococcus faecalis (ATCC 29212). Проведение контроля качества постановки антибиотикочувствительности необходимо ввести с применением контрольного штамма Streptococcus pneumoniae ATCC 49619
[113,114].

36
Индикаторами качества постаналитического этапа исследования являются: интерпретация и оценка результатов анализа, предоставление отчета исследования, клиническое использование результатов анализа, уровень внутриутробного инфицирования новорожденных и послеродовых гнойно-воспалительных инфекций рожениц, обобщенные сведения о чувствительности S. agalactiae к антимикробным препаратам с возможностью выбора альтернативной терапии (при наличии у беременной аллергической реакции к терапии пенициллинами).
9.2. Внешняя оценка качества исследования
Лабораториям рекомендовано участвовать в программах внешней оценки качества для подтверждения правильности своих результатов лабораторных исследований и возможности их сопоставления с результатами других лабораторий.
Организации, аккредитованные для проведения межлабораторной оценки качества выполнения лабораторных исследований периодически (несколько раз в год) рассылают контрольные штаммы для определения правильности проводимых микробиологических и молекулярно- генетических исследований. Лаборатория, получив данные сравнительной оценки правильности выполнения исследования, при неудовлетворительной оценке результатов должна принимать соответствующие меры для исправления своих ошибок.
Применения методов микробиологической диагностики инфекций, вызванных стрептококком группы В у беременных и новорожденных, выполнение их в установленные сроки и с высокой результативностью необходимо для реализации критериев оценки качества медицинской помощи, позволяющих оценить качество процесса оказания медицинской помощи беременным, роженицам, родильницам и новорожденным.

37
10. Критерии оценки качества оказания медицинской помощи по
группам заболеваний или состояний
Группа заболеваний или состояний
Акушерство и гинекология: Осложнения, связанные с беременностью;
Беременность, закончившаяся абортивным исходом; Родоразрешение,
Осложнения послеродового периода.
Код/коды по МКБ-10
А 49.1, В 95.1, О 42, О 42.0, О 42.1, О 42.2, О 42.9, О 60
Формы оказания медицинской помощи:
- экстренная - медицинская помощь, оказываемая при внезапных острых заболеваниях, состояниях, обострении хронических заболеваний, представляющих угрозу жизни пациента;
- неотложная - медицинская помощь, оказываемая при внезапных острых заболеваниях, состояниях, обострении хронических заболеваний без явных признаков угрозы жизни пациента;
- плановая - медицинская помощь, которая оказывается при проведении профилактических мероприятий, при заболеваниях и состояниях, не сопровождающихся угрозой жизни пациента, не требующих экстренной и неотложной медицинской помощи, и отсрочка оказания которой на определенное время не повлечет за собой ухудшение состояния пациента, угрозу его жизни и здоровью
Виды оказания медицинской помощи:
- первичная медико-санитарная помощь;
- специализированная, в том числе высокотехнологичная, медицинская помощь;
- скорая, в том числе скорая специализированная, медицинская помощь.
Условия оказания медицинской помощи:
- амбулаторно (в условиях, не предусматривающих круглосуточного медицинского наблюдения и лечения), в том числе на дому при вызове медицинского работника;
- в дневном стационаре (в условиях, предусматривающих медицинское наблюдение и лечение в дневное время, но не требующих круглосуточного медицинского наблюдения и лечения);
- стационарно (в условиях, обеспечивающих круглосуточное медицинское наблюдение и лечение).

38
1. Событийные (смысловые, содержательные, процессные) критерии
качества:
- Подготовлено направление и собран на лабораторное исследование вагинально-ректальный мазок беременной, при наличии одного и более факторов риска (рождение ребенка с СГВ-инфекцией в анамнезе, СГВ – бактериурия, преждевременные роды в анамнезе), культуральным методом с целью выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности стрептококка группы В

- Подготовлено направление и собрана на лабораторное исследование моча беременной, при наличии одного и более факторов риска (рождение ребенка с
СГВ-инфекцией в анамнезе, СГВ – бактериурия, преждевременные роды в анамнезе), культуральным методом с целью выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности стрептококка группы В

- Подготовлено направление и собран на лабораторное исследование вагинально-ректальный мазок роженицы, при преждевременных родах, преждевременном излитии околоплодных вод (более 18 часов) методом полимеразной цепной реакции и/или иммунохроматографическим методом с целью детекции (определения наличия) стрептококка группы В в родах

- Подготовлено направление и собрана венозная кровь родильницы с признаками инфекционного процесса на лабораторное исследование методом полимеразной цепной реакции с целью детекции (определения наличия) стрептококка группы В

- Подготовлено направление и собрана венозная кровь родильницы с признаками инфекционного процесса на лабораторное исследование на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы культуральным методом с целью выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности стрептококка группы В

- Собран и направлен на исследования биологический материал родильницы с признаками инфекционного процесса из соответствующего локуса или нескольких локусов (из предполагаемых очагов инфекции): моча, трахеальный аспират, отделяемое влагалища, отделяемое цервикального канала, аспират полости матки, пунктат абсцесса, раневое отделяемое, и т.д.


39
2. Временные критерии качества
-Вагинально-ректальный мазок беременной, при наличии одного и более факторов риска (рождение ребенка с СГВ-инфекцией в анамнезе, СГВ – бактериурия, преждевременные роды в анамнезе) собран и направлен на посев с целью выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности стрептококка группы В не позднее 2-х недель до планируемого родоразрешения

-Вагинально-ректальный мазок роженицы собран и направлен на лабораторное исследование, при преждевременных родах, преждевременном излитии околоплодных вод (более 18 часов) с возможностью отсроченного принятия решений в родах не раннее 8 часов, методом полимеразной цепной реакции с целью детекции (определения наличия) стрептококка группы В

-Вагинально-ректальный мазок роженицы собран и направлен на лабораторное исследование, при преждевременных родах, преждевременном излитии околоплодных вод (более 18 часов) без возможности отсроченного принятия решений в родах не позднее 1 часа тест-системой Xrert GBS или
ИХТ с целью экспресс-диагностики в родах наличия стрептококка группы В

- Проведена антибиотикопрофилактика в родах (в условиях стационара) от момента начала родов или преждевременного излития околоплодных вод при положительном результате ПЦР – исследования на наличие стрептококка группы В, проведенного в родах или при выявлении культуральным методом наличия носительства СГВ в течение данной беременности

- Биологический материал от родильницы с признаками инфекционного процесса собран и направлен на лабораторное исследование на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы культуральным методом с целью выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности стрептококка группы В _ не позже _6 часов_с момента_развития признаков инфекции

- Этиотропная антибактериальная терапия назначена не позже _одного часа с_момента сообщения о положительном результате ПЦР-исследования или культурального посева на наличие стрептококка группы В




40
3. Результативные критерии качества
– Отсутствие заражения новорожденного от матери стрептококком группы
В, после проведения антибиотикопрофилактики в родах

– Отсутствие инфекций новорожденного, вызванных стрептококком группы В, после проведения антибиотикопрофилактики в родах

– Отсутствие послеродовых инфекционных осложнений у родильницы, вызванных стрептококком группы
В после проведения антибиотикопрофилактики в родах



Группа заболеваний или состояний
Акушерство и гинекология: Послеродовой сепсис
Неонатология: Сепсис, дети
Код/коды по МКБ-10
А 40, А 40.1, О 85, Р 36, Р 36.0
Формы оказания медицинской помощи:
- экстренная - медицинская помощь, оказываемая при внезапных острых заболеваниях, состояниях, обострении хронических заболеваний, представляющих угрозу жизни пациента;
- неотложная - медицинская помощь, оказываемая при внезапных острых заболеваниях, состояниях, обострении хронических заболеваний без явных признаков угрозы жизни пациента;
Виды оказания медицинской помощи:
- специализированная, в том числе высокотехнологичная, медицинская помощь;
- скорая, в том числе скорая специализированная, медицинская помощь.
Условия оказания медицинской помощи:
- стационарно (в условиях, обеспечивающих круглосуточное медицинское наблюдение и лечение).
1. Событийные (смысловые, содержательные, процессные) критерии
качества
- Подготовлено направление и собрана венозная кровь на лабораторное исследование методом полимеразной цепной реакции с целью детекции
(определения наличия) стрептококка группы В


41
- Подготовлено направление и собрана венозная кровь на лабораторное исследование на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы культуральным методом с целью выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности стрептококка группы В

- Собраны и направлены на исследования биологический материал новорожденного с признаками инфекционного процесса из соответствующего локуса или нескольких локусов (из предполагаемых очагов инфекции): моча, трахеальный аспират, отделяемое ротоглотки, кал, пунктат, спинномозговая жидкость, раневое отделяемое, интубационная трубка и т.д.

- Собран и направлен на исследования биологический материал родильницы с признаками инфекционного процесса из соответствующего локуса или нескольких локусов (из предполагаемых очагов инфекции): моча, трахеальный аспират, отделяемое влагалища, отделяемое цервикального канала, аспират полости матки, пунктат абсцесса, раневое отделяемое, и т.д.

2. Временные критерии качества
- Биологический материал собран и направлен на лабораторное исследование методом полимеразной цепной реакции _не позже _6 часов_с момента_развития признаков инфекции кровотока

- Биологический материал собран и направлен на лабораторное исследование на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы культуральным методом с целью выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности стрептококка группы В _ не позже _6 часов_с момента_развития признаков инфекции кровотока

- Биологический материал от родильницы с признаками инфекционного процесса собран и направлен на лабораторное исследование на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы культуральным методом с целью выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности стрептококка группы В _ не позже _6 часов_с момента_развития признаков инфекции

-
Биологический материал от новорожденного с признаками инфекционного процесса собран и направлен на лабораторное исследование на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы культуральным

42 методом с целью выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности стрептококка группы В _ не позже _6 часов_с момента_развития признаков инфекции

- Этиотропная антибактериальная терапия назначена не позже _одного часа с_момента сообщения о положительном результате ПЦР-исследования или культурального посева на наличие стрептококка группы В

3. Результативные критерии качества
- После начала этиотропной антибактериальной терапии наблюдалась положительная динамика состояния пациента

Группа заболеваний или состояний
Неонатология: Малая масса тела при рождении, недоношенность; Крайне малая масса тела при рождении, крайняя незрелость; Лечение новорожденных с тяжелой патологией с применением аппаратных методов поддержки или замещения витальных функций.
Код/коды по МКБ-10
B 95.1, G 00.2, J 15.3, M 86, Р 23.3, Р23.9
Формы оказания медицинской помощи:
- экстренная - медицинская помощь, оказываемая при внезапных острых заболеваниях, состояниях, обострении хронических заболеваний, представляющих угрозу жизни пациента;
Виды оказания медицинской помощи:
- специализированная, в том числе высокотехнологичная, медицинская помощь;
- скорая, в том числе скорая специализированная, медицинская помощь.
Условия оказания медицинской помощи:
- стационарно (в условиях, обеспечивающих круглосуточное медицинское наблюдение и лечение).
1. Событийные (смысловые, содержательные, процессные) критерии
качества
- Подготовлено направление и собрана венозная кровь новорожденного с признаками инфекционного процесса на лабораторное исследование методом полимеразной цепной реакции с целью детекции (определения наличия) стрептококка группы В


43
- Подготовлено направление и собрана венозная кровь новорожденного с признаками инфекционного процесса на лабораторное исследование на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы культуральным методом с целью выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности стрептококка группы В

Каталог: upload -> medialibrary -> 5be
medialibrary -> «Сольное народное пение» (семилетнее обучение) Краткие методические указания
medialibrary -> Памятка для лечения под наркозом: Перед процедурой Перед лечением зубов под наркозом необходимо предоставить вашему лечащему врачу результаты следующих анализов
medialibrary -> Зворыгин И. А. О формате номенклатуры лабораторных исследований. Базовые определения
medialibrary -> Правила проведения клинических лабораторных исследований Москва, 2015 2 Разработчики


Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5


База данных защищена авторским правом ©stomatologo.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница