Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных стрептококком группы B



Pdf просмотр
страница5/5
Дата01.08.2018
Размер0,52 Mb.
1   2   3   4   5
ПРИЛОЖЕНИЯ
Приложение 1.
Материально-техническое оснащение, необходимое для выполнения
исследования
Наименование медицинских изделий,
оборудования, мебели
Наименование реактивов и расходных
материалов
Базисное оснащение
Ламинарный бокс 2 класса биологической безопасности, оснащенный
НЕРА- фильтром
Контейнер стерильный с завинчивающейся крышкой для взятия, хранения и транспортировки биологических образцов
Микроскоп бинокулярный с иммерсионным объективом
Пробирка стерильная (без наполнителя или с транспортной средой) с аппликатором для взятия биологических образцов
Термостат электрический
Чашки Петри одноразовые стерильные
Автоклав для стерилизации питательных сред или автоматическая средоварочная машина
Петли микробиологические диаметром 1 и
10 мкл (стерильные или многоразовые)
Автоклав для утилизации отработанного материала
Шпатели Дригальского стерильные
Сухожаровой шкаф
Стекла предметные
Холодильник для хранения готовых питательных сред, биологических субстратов и реагентов
Пипетки пластиковые пастеровские стерильные
Спиртовые, газовые горелки или стерилизаторы микробиологических петель
Микропробирка, стерильная
Дистиллятор
Стерильный ватный тампон
Электрическая плита
Наконечники для дозаторов полуавтоматических
Бактерицидные лампы или облучатель- рециркулятор
Пакеты для автоклавирования
Стол лабораторный химический
Набор реагентов для окраски мазков по
Граму
Стандарт мутности по МакФарланду или прибор
(спектрофотометр) для определения мутности суспензии микроорганизмов
Иммерсионное масло
Дозаторы переменного объема полуавтоматические
Питательная среда основа кровяного агара для неселективного культивирования прихотливых бактерий
Контейнеры для сброса отходов
Кровь (баранья, крупного рогатого скота, лошадиная) дефибринированная для питательных сред, стерильная
Емкости с дезинфицирующим раствором Реагенты для определения уреазной, каталазной и оксидазной активности

57
Спирт этиловый 95 град
Хромогенный агар для селективного выделения стрептококков группы В
Перчатки нестерильные
Флакон с питательной средой для посева стерильного биоматериала
(кровь, спинномозговая жидкость и т.д.)
Маска трехслойная одноразовая
Питательная среда Мюллера-Хинтона для постановки антибиотикочувствительности
Клип-берет одноразовый лабораторный
Дифференциально-диагностические латексы для проведения идентификации стрептококков (латекс-агглютинация)
Карандаши восковые, алмазные карандаши, водостойкие фломастеры
Диски с антибактериальными препаратами: пенициллин, клиндамицин, эритромицин, ванкомицин
Линейка, штангенциркуль для учета результатов определения чувствительности диско-диффузионным методом
Дифференциально-диагностические диски
(оптохин, бацитрацин, оксидаза и т.д.)
Контрольный штамм Enterococcus faecalis
ATCC 29212 для проведения контроля качества
Контрольный штамм Staphylococcus aureus
ATCC 25923 для проведения контроля качества
Контрольный штамм
Streptococcus
pneumoniae АТСС 49619 для проведения контроля качества
Дополнительное оснащение
Автоматизированное рабочее место
(сканер штрих кодов, компьютер с ЛИС, принтер)
Готовые питательные среды в чашках Петри
(кровяной агар, хромогенный агар для культивирования стрептококков группы В)
Анализатор для гемокультивирования
Пробирка с транспортной средой Lim бульон
Анализатор для идентификации по биохимическим свойствам или белковому спектру и/или определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам
Иммунохроматографический тест для экспресс диагностики стрептококков группы
В
Анализатор для проведения полимеразно- цепной реакции в режиме «реального времени»
Картридж Xpert GBS для экспресс- диагностики стрептококка группы В
Анализатор Gene Xpert для экспресс- диагностики стрептококка группы В
Тест-панель для идентификации и определения антибиотикочувствительности одного штамма микроорганизма на анализаторе
Автоматический прибор для учета результатов определения чувствительности диско-диффузионным методом
Дополнительные реагенты для инокуляции суспензии культур микроорганизмов на тест- панель

58
Инкубатор для микроаэрофильного культивирования (инкубатор CO
2
) или анаэростат-контейнер или газогенерирующие пакеты или эксикатор
Реактивы для проведения биохимической идентификации микроорганизмов на тест – панель
Низкотемпературный холодильник
Реактив матрица для белковой экстракции
Вортекс
Градиентные полоски E-test для определения чувствительности к антибиотикам
Криопробирки или питательная среда триптиказо-соевый бульон для заморозки культур бактерий

Приложение 2.
Идентификация Streptococcus agalactiae
Фенотипическая характеристика β-гемолитических стрептококков


Постановка САМР-теста
S. agalactiae продуцирует внеклеточный белок (САМР – фактор), который, действуя совместно со стафилококковым бета-лизином, обусловливает лизис эритроцитов. Применяют тест для дифференциации негемолитических или слабогемолитических штаммов СГВ. На поверхность кровяного агара наносят толщиной не более 3 мм через центр чашки сплошной линией суточную
Вид
Се
р
олог
и
ч
ес
к
ая г
р
уп
п
а
Раз
ме
р

к
олони
й
п
ри

24 ч
ас
овой

и
н
к
уба
ц
и
и

Бац
и
тр
оц
и
н

PY
R
-
те
ст

CA
M
P
-
т
ес
т
Т
ес
т Фог
ес
-
Пр
ос
к
ауэра
(VP
)
Г
и
др
олиз
ги
п
п
ур
ата

Т
р
ег
алоз
а
Сорби
тол

S. pyogenes
А
> 0,5 мм
+
+

2


+

S. agalactiae
В
> 0,5 мм


+

+
Вар иаб.

S. dysgalactiae
подвид
equisimilis
A, B, С, L
> 0,5 мм





-
S. equi подвид
zooepidemicus
С
> 0,5 мм





+
+
Группа
S.anginosus*
A,C,G,F, нетипируе- мые
< 0,5 мм



+

+


59 бульонную культуру контрольного штамма Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Спустя несколько минут на эту же чашку отступя на 2 мм от нее перпендикулярными штрихами сеют до 4 тестируемых суточных культур СГВ.
После 15-18-часовой инкубации при 35°С учитывают результаты. Большинство штаммов S. agalactiae индуцирует образование расширенных зон гемолиза в виде
«бабочки» вблизи зоны роста S. aureus.
Постановка реакции латекс – агглютинации
При постановке теста окрашенные латексные частицы, на которых адсорбированы группо- и типоспецифические антитела вступают в реакцию агглютинации с антигеном клеточной стенки СГВ. В результате выполнения теста образуется четкая читаемая структура зернистой агглютинации. Тест проводят на предметном стекле или агглютинационных пластинах с лунками в соответствии с рекомендацией производителя.
Приложение 3.

Проведение масс-спектрометрической идентификации S. agalactiae
Стерильной пластиковой петлей (иглой) снять с поверхности агаровой среды
1-2 изолированные колонии суточной культуры СГВ и поместить на две ячейки стальной мишени масс-спектрометра (двукратное (дублированное) нанесение).
1.
Сверху нанести 1 мкл матрицы.
2.
Мишень поместить в масс-спектрометр и создать проект с указанием точек для идентификации и данные по образцу.
Программное обеспечение осуществляет снятие и обработку масс-спектра микроорганизма, сравнение с базой данных, выведение результата идентификации в виде таблицы и расчет коэффициента достоверности (score).
Достоверными считаются результаты, при score >1,7. Уровень достоверности идентификации выше 2,0 свидетельствует о точной видовой идентификации, уровень достоверности от 1,7 до 2,0 – о точной идентификации до рода, отрицательными считались результаты с score < 1,7.

60
Приготовление рабочего раствора матрицы
1.
Приготовить основной органический растворитель, смешав 20 мл 50% ацетонитрила с 20 мл 2,5% трифторуксусной кислоты.
2.
Поместить несколько кристаллов α-циано-4-гидроксикоричной кислоты в микроцентрифужную пробирку и смешать с 200-500 мкл основного органического растворителя (из расчета 10 мг кристаллов матрицы и 1 мл основного органического растворителя).
3.
Перемешать 2-3 минуты на вортексе до полного растворения.
Полученный раствор матрицы и основной органический растворитель можно хранить при комнатной температуре 1-2 недели.
Приложение 4.
Проведение иммунохроматографического теста для прямого выявления
S. agalactiae из биологического материала
ИХТ является иммунологическим методом диагностики, основанном на обнаружении антигенов S. agalactiae. В настоящее время ИХТ выпускают на основе моноклональных антител к антигену СГВ, прикрепленных к частицам коллоидного золота и латексным частицам. Тест-полоски погружают в пробирку с экстрактом тестируемой пробы или при использовании кассеты пробу вносят в ее окошко в соответствии с рекомендацией производителя.

Приложение 5.
Проведение прямого выявления S. agalactiae в вагинально-ректальном
мазке с применением картриджа Xpert GBS
Процедура работы с набором реагентов для выделения СГВ:
1. Достать из холодильника картридж Xpert GBS и реагенты. Вскрыть упаковку.

61 2. Достать тампон, содержащий тестируемый клинический материал, из пробирки с транспортной средой, поместить и встряхнуть в камере картриджа Xpert GBS. В случае использования анализатора Gene Xpert по месту лечения вагинально-ректальный мазок можно забрать на тампон без транспортной среды.
3. Закрыть крышку картриджа и поместить его в модуль аппарата
GeneXpert Dx и просканировать штрих-код картриджа.
4. В окне Sample ID ввести информацию о пациенте и номер образца.
5. Нажать Start Test.
6. После завершения тестирования картридж извлечь из модуля прибора и поместить в контейнер для утилизации отработанного материала.

62
Приложение 6.




















Беременность
Первичное обращение
Наличие одного и более факторов риска
1. Рождение ребенка с СГВ-инфекцией в анамнезе
2. СГВ – бактериурия
3. Преждевременные роды в анамнезе
Оценка клинического состояния и лабораторных данных
Бессимптомное ректо-
вагинальное носительство СГВ
Вагиниты,
ассоциированные с СГВ
СГВ – бактериурия (в т.ч. бессимптомная)
Лечение
Контроль
Клиническое
наблюдение

Антибиотикопрофилактика в родах
СГВ -
СГВ +
Антибиотикопрофилактика в родах
не требуется
Посев на СГВ вагинально-ректальных мазков
и мочи с определением
антибиотикочувствительности

63
Приложение 7.




















Роженицы

В родах

Антибиотикопрофилактика в родах
СГВ+
СГВ –
Xrert GBS и ПЦР-РТ
Антибиотикопрофилактика
в родах не требуется
Выявление СГВ
молекулярно-генетическим
методом ПЦР-РТ
Возможность
отсроченного
принятия решений
Экспресс-методы
диагностики СГВ
Xrert GBS
или ИХТ
*

4.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 12 ноября 2012г. № 572н Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю «Акушерство и гинекология»
5. Преждевременные роды
6. Преждевременное излитие околоплодных вод (более 18
часов)
СГВ +
СГВ –
ИХТ
*
Вследствие низкой чувствительности ИХТ и для определения дальнейшей тактики ведения новорожденного ребенка необходимо подтверждение отрицательного результата ИХТ методом ПЦР-РТ

64
Приложение 8.




















Новорожденные
Клинические признаки инфекций
Любой биологический материал

Антибиотикотерапия
β-лактамами
СГВ +
СГВ -
Выявление СГВ молекулярно-
генетическим методом ПЦР-РТ или
посев на СГВ с определением
антибиотикочувствительности

СГВ инфекции нет
Антибиотикотерапия не
показана


65
Приложение 9.

Каталог: upload -> medialibrary -> 5be
medialibrary -> «Сольное народное пение» (семилетнее обучение) Краткие методические указания
medialibrary -> Памятка для лечения под наркозом: Перед процедурой Перед лечением зубов под наркозом необходимо предоставить вашему лечащему врачу результаты следующих анализов
medialibrary -> Зворыгин И. А. О формате номенклатуры лабораторных исследований. Базовые определения
medialibrary -> Правила проведения клинических лабораторных исследований Москва, 2015 2 Разработчики


Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5


База данных защищена авторским правом ©stomatologo.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница